Diabetologia：激活但功能毁损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出有现胰脏自身突变到出有现1DF哮喘临床患者的方面率在成年人末期就有极好的揭示，多个胰脏自身突变阴性的成年人里有70%在肝脏转换后10年末中风哮喘，而随访15年的成年人这一比重减低到84%。相相比较之下，占临床1DF哮喘一半以上的DF1DF哮喘的发作选择性还从未给与前提的有系统研究。

越来越多的人开始应用于再行系统来下定义1DF哮喘的方面：变异在出有现多种胰脏自身突变时进入第1前期，出有现血糖异常时进入第2前期，出有现患者时进入第3前期。一些多发胰脏自身突变阴性的变异，在1期和2期，方面很慢，并的发展为发作的1DF哮喘。我们前揭示了两组成员在首次侦测到多种胰脏自身突变采样后据估计10年无哮喘的极慢方面者，这组成员病症000人较少，但特质非常清楚。随后，我们辨认出胰脏自身上皮细胞选择性CD8+T细胞会底物在方面平稳的病症里整体不发挥作用，但在早先发作和近十年发挥作用的哮喘病症里很易于侦测到。这可能表明，与方面病症相相比较，这些病症免疫性底物的调节增强。

早期有系统研究表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量较长时间，但哮喘病症发挥作用一些功能缺陷，其里最主要对IL-2的底物能够减低。此外，哮喘病症里的现像CD4+T细胞会可能对调节更为重要抵抗性，表现为现像T细胞会的诱发消退，自然消除的Treg和排泄消除的诱导Treg，以及上皮细胞历程的CD4+T细胞会里IL-2底物消退。本有系统研究的目的是揭示了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群极平稳方面者里的特质，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX有系统研究是一项以人群为基础的纵向有系统研究，在21岁此表住院的病症亲属里检查1DF哮喘的有可能因素。我们前揭示了近十年平稳方面者的特质，他们保证多重胰脏自身突变阴性超过10年，但从未出有现哮喘的临床患者，慢性或非展开性免疫性。随后，10名继续保证无哮喘并愿意包括大量血液采样的平稳方面者纳入T和B细胞会功能数据分析。在目前的有系统研究里，8名慢方面者(SP组成员)，里位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身突变阴性。所有的举例来说都保持稳定1DF哮喘方面的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些上皮细胞的阴性底物，然而，一名病症早就保持稳定2期据估计6年，但从未出有现临床患者，一名病症被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NADP展开了单独评量。裂解外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会精和T细胞会诱发试验评量NADP里Treg的kHz、表DF和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)展开无监督聚类数据分析，评量Treg表DF。

结果：与保健NADP相相比较，来自慢方面体的失忆CD4+T细胞会的监督聚类推测，酪氨酸的失忆CD4+ TregkHz减低，与糖皮质激素诱导的TNFR之外蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的病症与方面平稳者和匹配的对照组成员相相比较，Treg谱有所不尽相同。功能数据分析表明，与保健NADP相相比较，来自平稳方面体的Treg内源性的CD4+现像T细胞会诱发明显毁坏。表现为对现像CD4+T细胞会CD25和CD134传达的诱发减低。

所示1 有系统的表DF数据分析推测，CD4+Treg亚DF在慢方面配置文件里减低。由FlowSOM作用于的Treg四楼，汇聚在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标上物传达鉴定出有10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个不尽相同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个节点都是一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点组成员周围上色。每个节点里的碗所示透露单个标上的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整体标上传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相相比较重元素为每个metacluster盒新线所示(重元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。深蓝色格子都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推透露法秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模DF证实，TregkHz的减低是方面平稳的标识。AO去极化(a - f)和柑橘数据分析(g-k)相比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的指标性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达展开裂解，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及NADPSP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的kHz统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化同构的盒新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值上色，箭头引人注意有的簇被标识为SP和HD配置文件之间的不尽相同。(j)盒新线所示推测了在SP(白点)和HD(灰点)组成员里，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相相比较重元素(比重)。(k)直方所示推测每个簇的表DF(粉红色)和Treg标上相相比较传达与背景传达(白色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推透露法秩检验

所示3 与保健献血者相相比较，方面平稳者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR传达结合，推测直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon类推透露法秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NADP最主要，p< 0.05(白色)NADPSP 606和匹配的HD不最主要在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从AO去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(深蓝色)结合，推测直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推透露法秩检验

所示4 来自平稳方面的CD4+ treg细胞会控制现像CD4+T细胞会的能够减低。SP组成员用白色的新线和格子透露，HD组成员用黑色的新线和格子透露，深蓝色的新线/格子透露NADPsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠诱导细胞会，培植3天内展开流式细胞会精侦测。(a-d)与CD4+转发者相相比较应的treg培植(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。应用于阴性对照(酪氨酸的响应细胞会另有treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

所示5 现像CD4+T细胞会对平稳方面的T细胞会诱导的诱发更尖锐。SP组成员用白色的新线和格子透露，HD组成员用黑色的新线和格子透露，深蓝色的新线/格子透露NADPsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按通过观察的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠诱导细胞会，培植3天内展开流式细胞会精(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

事实：我们得出有的事实是，来自平稳方面子的诱导失忆CD4+Treg在GITR传达里给与了扩展和丰富，合理化了全面性有系统研究Treg在1DF哮喘风险变异里的异质性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28