Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显露现家兔自身病原棒状到显露现1HG肾病临床研究症状的的发展率在婴幼儿一时期就有更好的描绘，多个家兔自身病原棒状阴性的婴幼儿当中有70%在血清转换后10年内患病肾病，而随访15年的婴幼儿这一比率提高到84%。相对于之下，占临床研究1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的发病机制还未得到更好的数据分析。

愈发多的人开始用到分期该系统来定义1HG肾病的的发展：有机棒状在显露现多种家兔自身病原棒状时离开第1下一阶段，显露现血糖出现异常时离开第2下一阶段，显露现症状时离开第3下一阶段。一些多发家兔自身病原棒状阴性的有机棒状，在1期和2期，的发展较近于快，并发展为发病的1HG肾病。我们早先描绘了一一组在首次验证到多种家兔自身病原棒状样品后仅仅10年无肾病的近于近于快的发展者，这一组病症人数少，但特征非常明确。随后，我们推断出家兔自身蛋白特异性CD8+T支线粒棒状反应在的发展减近于快的病症当中基本不普遍存在，但在近期发病和长期以来普遍存在的肾病病症当中很容易验证到。这可能说明了，与的发展病症相对于，这些病症自身抗棒状的调节增强。

早期数据分析说明了，尽管调节性T支线粒棒状(Treg)使用量短时间，但肾病病症普遍存在一些功用缺陷，其当中包括对IL-2的反应能力下降。此外，肾病病症当中的畸变CD4+T支线粒棒状可能对调节更具抵抗性，展现出为畸变T支线粒棒状的诱发移向，自然消除的Treg和胃消除的抑止Treg，以及蛋白随之而来的CD4+T支线粒棒状当中IL-2反应移向。本数据分析的目的是描绘了CD4+调节性T支线粒棒状(Treg)在海岸边近于减近于快的发展者当中的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群辅以的纵向数据分析，在21岁请注意确诊的病症亲属当中连锁反应对1HG肾病的危险因素。我们早先描绘了长期以来减近于快的发展者的特征，他们始终保持多重家兔自身病原棒状阴性超过10年，但未显露现肾病的临床研究症状，近于快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续始终保持无肾病并想发放大量肾脏样品的减近于快的发展者归属于T和B支线粒棒状功用分析。在现阶段的数据分析当中，8名近于快的发展者(SP一组)，当中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身病原棒状阴性。所有的发起者都东南面1HG肾病的发展的1期，尽管一些人随后得不到了家兔自身病原棒状对某些蛋白的阴性反应，然而，一名病症已经东南面2期仅仅6年，但未显露现临床研究症状，一名病症被病人为肾病，该人脑72岁，在热带植物实验样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析当中对该酪氨酸同步进行了单独评量。分离外周血单个连锁反应支线粒棒状(PBMCs)，改用多参数流式支线粒棒状练成和T支线粒棒状诱发试验评量酪氨酸当中Treg的阈值、表HG和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和重回)同步进行无委派聚类分析，评量Treg表HG。

结果：与肥胖酪氨酸相对于，来自近于快的发展棒状的潜意识CD4+T支线粒棒状的委派聚类结果显示，转录的潜意识CD4+ Treg阈值提高，与糖皮质激素抑止的TNFR相关受棒状(GITR)表述提高有关。一名HbA1c急剧下降的病症与的发展减近于快者和匹配的对照一组相对于，Treg谱有所不同。功用分析说明了，与肥胖酪氨酸相对于，来自减近于快的发展棒状的Treg介导的CD4+畸变T支线粒棒状诱发明显受损。展现出为对畸变CD4+T支线粒棒状CD25和CD134表述的诱发提高。

绘显露1 深入的表HG分析结果显示，CD4+Treg亚HG在近于快的发展缓冲区当中提高。由FlowSOM转化的Treg二楼，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -支线粒棒状上。根据上标物表述解剖显露10个元簇:潜意识T支线粒棒状_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T支线粒棒状;HLA-DR + GITR +潜意识T支线粒棒状;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个不同Treg上标转化的10个元簇的MST。每个端口代表人一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在端口一组附近上色。每个端口当中的饼绘显露回应单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热绘显露，以结果显示整棒状上标表述。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化绘显露，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对使用量级为每个metacluster箱内支线绘显露(使用量级> 0.05%)考虑到为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T支线粒棒状(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T支线粒棒状(l)。粉红色圆圈代表人这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于绘显露形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘显露2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg阈值的提高是的发展减近于快的标志。分级离子通道(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T支线粒棒状上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表人性绘显露。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(小点)和SP(蓝点)一组以及酪氨酸SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的阈值汇总绘显露。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道偏序的箱内支线绘显露;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度后处理，箭头突显露的簇被标识为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)箱内支线绘显露结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对使用量级(比率)。(k)支配点结果显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg上标相对表述与背景表述(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇当中上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

绘显露3 与肥胖献血者相对于，的发展减近于快者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T支线粒棒状元簇(潜意识T支线粒棒状_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T支线粒棒状;HLA-DR + GITR +潜意识T支线粒棒状;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表述热绘显露(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表述接在，结果显示支配点(c)和汇总绘显露(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(粉红色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)接在，结果显示支配点(e)和汇总绘显露(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

绘显露4 来自减近于快的发展的CD4+ treg支线粒棒状支配畸变CD4+T支线粒棒状的能力下降。SP一组用粉红色的支线和圆圈回应，HD一组用黑色的支线和圆圈回应，粉红色的支线/圆圈回应酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒棒状同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸支线粒棒状，人才3天后同步进行流式支线粒棒状练成验证。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg人才(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。用到阴性对照(转录的响应支线粒棒状都有treg)计算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘显露5 畸变CD4+T支线粒棒状对减近于快的发展的T支线粒棒状酪氨酸的诱发更敏感。SP一组用粉红色的支线和圆圈回应，HD一组用黑色的支线和圆圈回应，粉红色的支线/圆圈回应酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒棒状同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸支线粒棒状，人才3天后同步进行流式支线粒棒状练成(CD25反染)和支线粒棒状因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同人才。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显露的结论是，来自减近于快的发展子的酪氨酸潜意识CD4+Treg在GITR表述当中得到了扩大和充沛，强调了必要数据分析Treg在1HG肾病效用有机棒状当中的异质性的必要。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28